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考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒說明書
更新時間:2025-07-14 點擊量:178

考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒說明書

微量法

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

規(guī)格: 100T/96S

產品內容:

試劑一:液體25mL×1 瓶,4℃保存。

標準品:500μg/mL×1 瓶,4℃保存,臨用前用蒸餾水稀釋為50μg/mL。

產品說明:

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

在酸性溶液中,考馬斯亮藍G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物:該復合物在595nm處有最大吸 收峰。 其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高,適合微量蛋白質分析。

自備儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣品中可溶性蛋白質提取

1.   液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。

2.   組織樣品:按照組織質量 (g) :提取液體積(mL)為1:5~ 10 的比例 (建議稱取約0. 1g組織,加入 1mL 提取液 (自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水) ) 。冰浴勻漿,    10000rpm ,4℃離心10min ,取上清,即待測液。  (動物樣品常常需要稀釋)

3.   細菌、真菌:按照細胞數量 (104個) :提取液體積 (mL) 為500~ 1000:1 的比例 (建議500 萬細 胞加入1mL 提取液) ,冰浴超聲波破碎細胞 (功率300w ,超聲3 s ,間隔7s ,總時間3min ) ;然后 10000rpm ,4℃ ,離心10min ,取上清置于冰上待測。

二、吸光值測定

1.   分光光度計預熱30 min 以上,蒸餾水調零。

2.   空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL 蒸餾水,250μL 試劑一,混勻后室溫靜置10min ,取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,記為A 空白管。

3.   標準管:取0.5 mL EP管,加入40μL 標準液,250μL 試劑一,混勻后室溫靜置10min ,取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,記為A 標準管。

4.   測定管:取0.5 mL EP管,加入40μL 待測液,250μL 試劑一,混勻后室溫靜置10min ,取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,記為A 測定管。

三、蛋白質含量:

C 待測 (μg/mL) =50×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)

C 標準管:標準品蛋白質濃度,50μg/mL。

注意事項:

1.   加考馬斯亮藍后,在10~20min 內吸光值相對較穩(wěn)定,因此須在10~20min 完成比色。

2.   不宜用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,測完成后立即用95%乙醇沖洗。

3.   測定前用1~2 個樣做預實驗,確保蛋白濃度在0~ 100μg/ml 范圍內,否則需要做相應稀釋。

本產品僅供科學研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!

2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗技術及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯系。

實驗技術服務:


滬公網安備 31011802001677號

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